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细胞复苏的步骤及注意事项

更新时间:2022-12-23      点击次数:586
  细胞复苏,生物学的一种术语,是指将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养,细胞恢复生长的过程。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。
  细胞复苏的步骤:
  ①将冷冻管从液氮中取出,迅速投入37℃水浴融化,细胞融化后要尽快(约1min)移出37℃水浴。37℃水浴时间延长会提高细胞死亡率,复苏过程中一般细胞死亡率在20%~25%之间。
  ②迅速用酒精棉球擦拭冷冻管外部杀菌消毒,然后放置在冰浴上。
  ③小心开启瓶盖,把细胞转入含有4mL培养基的培养瓶中,然后把培养瓶移至培养箱,26℃~28℃培养1h,让细胞贴壁。
  ④细胞贴壁后,小心移弃培养基,主要是去掉DMSO(悬浮生长细胞要通过离心沉淀除去DMSO)、死细胞及其碎片,加5mL新鲜培养基,26℃~28℃培养。
  ⑤细胞培养24h后,更换新鲜培养基,继续培养直到形成单层,便可以传代。
  ⑥详细记录复苏细胞的名称、数量、复苏时间、存放部位等。
  细胞复苏的注意事项:
  1、注意无菌操作。
  2、应在1-2min内使冻存液融化。如果复温速度太慢,则会造成细胞损伤。另外,细胞复苏后的操作-好在4℃冰浴中进行,以减少冷冻保护剂对细胞的毒性。
  3、细胞复苏过程中,升温的速率要大,把从液氮或-70℃冰箱中取出的细胞在短的时间内放入水浴锅。
  4、细胞放入水浴中注意用镊子夹住细胞冻存管并在水浴中不时晃动,使其受热均匀,并防止水浴时水进入细胞冻存管污染细胞。打开细胞冻存管之前要用酒精棉球将冻存管消毒并晾干。
  5、液氮操作有一定的危险性,打开液氮罐取出细胞时,戴上防护眼镜。
  6、如果冻存管密封不严,液氮可被吸入。由于解冻时冻存管中的气温急剧上升,将可能发生爆炸。复苏过程中应盖上恒温水浴锅的盖。

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